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公开(公告)号：CN117363639A
公开(公告)日：2024-01-09
申请号：CN202311656709.2
申请日：2023-12-06
申请人： 温氏食品集团股份有限公司
摘要： 本发明提供基于生物素连接酶的蛋白邻近标记系统、方法及应用，该蛋白邻近标记系统包括含有生物素连接酶TurboID编码核苷酸序列的重组质粒、含有目标蛋白编码核苷酸序列的重组质粒以及用于诱导表达生物素连接酶TurboID和目标蛋白的细胞系。本发明利用含有生物素连接酶TurboID编码核苷酸序列的重组质粒和含有目标蛋白编码核苷酸序列的重组质粒在大肠杆菌中共表达，在体内进行邻近标记，纯化后直接获得一种Biotin‑EFTu（生物素标记的目标蛋白），经质谱鉴定，该生物素标记时为单一位点标记，标记效率高，表达完即标记完，不需要进行额外的操作，工艺简单，操作便捷，可为高通量表达与筛选蛋白提供思路。
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公开(公告)号：CN117402902B
公开(公告)日：2024-04-16
申请号：CN202311683884.0
申请日：2023-12-11
申请人： 温氏食品集团股份有限公司
摘要： 本发明提供引物组合物及其在制备T载体上的应用，该引物组合物具有2条互补序列pComT‑F和pComT‑R，pComT‑F和pComT‑R的核苷酸序列分别如SEQ_1和SEQ_2所示。采用该引物组合物制备T载体的方法包括：两条互补的引物在变性退火后形成带粘性末端的双链DNA，该双链DNA带有2个XcmI酶切位点，使用限制性内切酶对载体进行酶切，将酶切后的载体和引物形成的双链DNA进行连接，最后转化感受态细胞，获得序列正确的克隆体；将克隆体进行质粒提取，经XcmI酶切，即得。整个制备T载体的工艺过程成本低、操作方便、T载体连接效率达到80%以上，甚至可以达到87.5%以上，为后续的分子克隆、噬菌体抗体文库构建、可溶表达载体构建提供研究基础。
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公开(公告)号：CN117363639B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202311656709.2
申请日：2023-12-06
申请人： 温氏食品集团股份有限公司
摘要： 本发明提供基于生物素连接酶的蛋白邻近标记系统、方法及应用，该蛋白邻近标记系统包括含有生物素连接酶TurboID编码核苷酸序列的重组质粒、含有目标蛋白编码核苷酸序列的重组质粒以及用于诱导表达生物素连接酶TurboID和目标蛋白的细胞系。本发明利用含有生物素连接酶TurboID编码核苷酸序列的重组质粒和含有目标蛋白编码核苷酸序列的重组质粒在大肠杆菌中共表达，在体内进行邻近标记，纯化后直接获得一种Biotin‑EFTu（生物素标记的目标蛋白），经质谱鉴定，该生物素标记时为单一位点标记，标记效率高，表达完即标记完，不需要进行额外的操作，工艺简单，操作便捷，可为高通量表达与筛选蛋白提供思路。
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公开(公告)号：CN117402902A
公开(公告)日：2024-01-16
申请号：CN202311683884.0
申请日：2023-12-11
申请人： 温氏食品集团股份有限公司
摘要： 本发明提供引物组合物及其在制备T载体上的应用，该引物组合物具有2条互补序列pComT‑F和pComT‑R，pComT‑F和pComT‑R的核苷酸序列分别如SEQ_1和SEQ_2所示。采用该引物组合物制备T载体的方法包括：两条互补的引物在变性退火后形成带粘性末端的双链DNA，该双链DNA带有2个XcmI酶切位点，使用限制性内切酶对载体进行酶切，将酶切后的载体和引物形成的双链DNA进行连接，最后转化感受态细胞，获得序列正确的克隆体；将克隆体进行质粒提取，经XcmI酶切，即得。整个制备T载体的工艺过程成本低、操作方便、T载体连接效率达到80%以上，甚至可以达到87.5%以上，为后续的分子克隆、噬菌体抗体文库构建、可溶表达载体构建提供研究基础。
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