公开(公告)号：CN118910113A

公开(公告)日：2024-11-08

申请号：CN202411139079.6

申请日：2024-08-20

申请人： 湖北共同甾体药物研究院有限公司

发明人： 张蓉 ,  罗欣然 ,  徐子捷 ,  王小俊 ,  系祖斌 ,  李明磊 ,  姚立成

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P33/02 ,  C12N15/31 ,  C12N15/53 ,  C12N1/38 ,  C12R1/19

摘要： 本发明涉及微生物制药及医药化工技术领域，提出了一种重组菌的构建及其制备醋酸泼尼松的方法，所述重组菌的构建方法，包括以下步骤：S1，扩增SUMO蛋白基因和KsdD5蛋白酶基因，然后将pET28a质粒酶切后与SUMO基因和KsdD5基因无缝连接，获得重组质粒pET28a‑SUMO‑KsdD5；S2，将重组质粒pET28a‑SUMO‑KsdD5转化至大肠杆菌BL21感受态细胞，培养后得到重组菌。本发明将SUMO基因与KsdD5连接于pET28a(+)质粒上，得到重组脱氢酶质粒，随后进行融合表达，可利用细胞本身的FAD辅酶再生体系，无需添加外源性的辅酶FAD；此外SUMO蛋白提高了脱氢酶KsdD5在大肠杆菌BL21(DE3)中的溶解性，以及蛋白表达量，同时也提高了脱氢酶KsdD5转化醋酸泼尼松的效率。

公开(公告)号：CN118879652A

公开(公告)日：2024-11-01

申请号：CN202411059400.X

申请日：2024-08-03

申请人： 湖北共同甾体药物研究院有限公司

发明人： 张蓉 ,  罗欣然 ,  徐子捷 ,  王小俊 ,  系祖斌 ,  李明磊 ,  姚立成

IPC分类号： C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N15/11 ,  C12N1/21 ,  C12P33/02 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提出了一种3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的突变体、重组表达载体、重组工程菌及其应用，涉及酶工程技术领域。所述突变体包括氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的突变体M1和氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示突变体M2。该重组表达载体包括上述的突变体M1的编码基因，或者上述的突变体M2的编码基因。3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的突变体M1和突变体M2具有更高浓度的底物添加量、更低浓度的酶用量和更快的转化效率。