一种高载量固定化扁桃酸消旋酶的制备方法

    公开(公告)号:CN108823196B

    公开(公告)日:2022-01-18

    申请号:CN201810686449.6

    申请日:2018-06-21

    发明人: 顾佳黎 童红飞

    IPC分类号: C12N11/10

    摘要: 本发明公开了一种高载量固定化扁桃酸消旋酶的制备方法。具体步骤如下:1)葡聚糖接枝型琼脂糖介质的制备;2)介质的活化;3)介质的溴代醇化;4)介质偶联亚氨基二乙酸;5)介质螯合二价金属离子;6)固定化扁桃酸消旋酶。本发明利用葡聚糖分子带有很多羟基的特点,制备螯合金属离子的葡聚糖接枝型琼脂糖介质来固定化扁桃酸消旋酶,提高消旋酶载量。本发明制得的固定化消旋酶对温度、pH的耐受性及操作稳定性均优于以螯合金属离子的葡聚糖未接枝型琼脂糖微球为介质得到的固定化消旋酶。

    一种柱上低pH病毒灭活的方法

    公开(公告)号:CN111991571A

    公开(公告)日:2020-11-27

    申请号:CN202010854069.6

    申请日:2020-08-12

    发明人: 顾佳黎

    IPC分类号: A61L2/02 C07K1/18

    摘要: 本发明属于生物技术领域,具体公开了一种柱上低pH病毒灭活的方法。具体步骤如下:1)阳离子层析柱平衡。2)蛋白样品上样。3)阳离子层析柱上样后冲洗。4)柱上低pH病毒灭活。5)阳离子层析柱再冲洗。6)蛋白洗脱回收。本发明的特色在于开发了一种快速便捷的低pH病毒灭活方法,方法的关键在于阳离子层析柱上直接进行低pH病毒灭活,操作步骤简单、工艺稳健、有利于保护对酸敏感的蛋白。

    一种柱上低pH病毒灭活的方法

    公开(公告)号:CN111991571B

    公开(公告)日:2022-04-05

    申请号:CN202010854069.6

    申请日:2020-08-12

    发明人: 顾佳黎

    IPC分类号: C07K1/18

    摘要: 本发明属于生物技术领域,具体公开了一种柱上低pH病毒灭活的方法。具体步骤如下:1)阳离子层析柱平衡。2)蛋白样品上样。3)阳离子层析柱上样后冲洗。4)柱上低pH病毒灭活。5)阳离子层析柱再冲洗。6)蛋白洗脱回收。本发明的特色在于开发了一种快速便捷的低pH病毒灭活方法,方法的关键在于阳离子层析柱上直接进行低pH病毒灭活,操作步骤简单、工艺稳健、有利于保护对酸敏感的蛋白。

    一种高载量固定化扁桃酸消旋酶的制备方法

    公开(公告)号:CN108823196A

    公开(公告)日:2018-11-16

    申请号:CN201810686449.6

    申请日:2018-06-21

    发明人: 顾佳黎 童红飞

    IPC分类号: C12N11/10

    摘要: 本发明公开了一种高载量固定化扁桃酸消旋酶的制备方法。具体步骤如下:1)葡聚糖接枝型琼脂糖介质的制备;2)介质的活化;3)介质的溴代醇化;4)介质偶联亚氨基二乙酸;5)介质螯合二价金属离子;6)固定化扁桃酸消旋酶。本发明利用葡聚糖分子带有很多羟基的特点,制备螯合金属离子的葡聚糖接枝型琼脂糖介质来固定化扁桃酸消旋酶,提高消旋酶载量。本发明制得的固定化消旋酶对温度、pH的耐受性及操作稳定性均优于以螯合金属离子的葡聚糖未接枝型琼脂糖微球为介质得到的固定化消旋酶。

    一种磁性微球的制备及其抗体分离的新方法

    公开(公告)号:CN105170042A

    公开(公告)日:2015-12-23

    申请号:CN201510618449.9

    申请日:2015-09-17

    发明人: 顾佳黎 童红飞

    摘要: 发明公开了一种磁性微球的制备及其抗体分离的新方法。具体步骤如下:1)磁性微球基质制备。2)磁性微球基质的活化。3)功能配基的偶联。4)将微球加入单抗细胞液中,并在振荡混合吸附抗体。5)用磁铁在三角瓶外壁吸住微球,倾倒掉细胞液,平衡缓冲液冲洗。6)加入解吸缓冲液,充分振荡,用磁铁从三角瓶外壁吸住微球,收集含有产品的解吸缓冲液。本发明所研制的具有疏水性电荷诱导效应的新型磁性微球,结合了疏水性电荷诱导效应和磁性响应的特点,具有高蛋白载量、解吸条件温和以及分离操作简便等优点,可用于直接从含有固体杂质的料液中高效分离抗体。

    一种基于磁性微球的抗体分离的方法

    公开(公告)号:CN105170042B

    公开(公告)日:2017-10-20

    申请号:CN201510618449.9

    申请日:2015-09-17

    发明人: 顾佳黎 童红飞

    摘要: 发明公开了一种基于磁性微球的抗体分离的方法。具体步骤如下:1)磁性微球基质制备。2)磁性微球基质的活化。3)功能配基的偶联。4)将微球加入单抗细胞液中,并在振荡混合吸附抗体。5)用磁铁在三角瓶外壁吸住微球,倾倒掉细胞液,平衡缓冲液冲洗。6)加入解吸缓冲液,充分振荡,用磁铁从三角瓶外壁吸住微球,收集含有产品的解吸缓冲液。本发明所研制的具有疏水性电荷诱导效应的新型磁性微球,结合了疏水性电荷诱导效应和磁性响应的特点,具有高蛋白载量、解吸条件温和以及分离操作简便等优点,可用于直接从含有固体杂质的料液中高效分离抗体。

    一种基于疏水性电荷诱导磁性微球的抗体荧光标记新方法

    公开(公告)号:CN105301230A

    公开(公告)日:2016-02-03

    申请号:CN201510866006.1

    申请日:2015-11-25

    发明人: 顾佳黎 童红飞

    IPC分类号: G01N33/533

    CPC分类号: G01N33/533

    摘要: 本发明公开了一种基于疏水性电荷诱导磁性微球的抗体荧光标记新方法。具体步骤如下:1)取适量待标记的抗体溶于孵育缓冲液,并加入疏水性电荷诱导磁性微球进行抗体的吸附。2)在外加磁场辅助下,用孵育缓冲液洗去未吸附的抗体,计算抗体的吸附量。3)根据抗体的吸附量,加入适量的异硫氰酸荧光素,将异硫氰酸荧光素与上述微球振荡混合,进行标记。4)标记完成后,在外加磁场的辅助下洗涤除去未反应的异硫氰酸荧光素,调节溶液pH至酸性解吸同收已标记的抗体。本发明所开发方法的特色在于设计了一种高效的抗体荧光标记的新方法。

    一种生物催化不对称反应还原酶及其应用

    公开(公告)号:CN118308316A

    公开(公告)日:2024-07-09

    申请号:CN202410426658.2

    申请日:2024-04-10

    摘要: 本发明涉及基因工程技术领域,公开了一种生物催化不对称反应还原酶及其应用,该还原酶的氨基酸序列是由野生型生物催化不对称反应还原酶氨基酸序列经过第125位苏氨酸突变为缬氨酸,第193位酪氨酸突变成丙氨酸,第233位亮氨酸突变为苯丙氨酸制得;该还原酶对邻氯苯甲酰甲酸甲酯具有高反应活性和高(R)‑选择性,该还原酶能够和葡萄糖脱氢酶偶联,催化反应底物邻氯苯甲酰甲酸甲酯特异性转化为(R)‑邻氯扁桃酸甲酯,本发明提供的生物催化不对称反应还原酶催化单位底物量时生物催化不对称反应还原酶的使用量更低、具有更高的酶活性、无需外源添加辅酶且生产原料使用量显著降低;应用到工业生产中能够显著提高生产效率,降低生产成本。

    一种从鸡蛋清中分离卵清白蛋白的方法

    公开(公告)号:CN107434825A

    公开(公告)日:2017-12-05

    申请号:CN201710815051.3

    申请日:2017-08-28

    IPC分类号: C07K14/77 C07K1/22

    CPC分类号: C07K14/77

    摘要: 本发明公开了一种从鸡蛋清中分离卵清白蛋白的方法。具体步骤如下:1)取新鲜鸡蛋,收集蛋清原液;2)加入稀释缓冲液,得到蛋清稀释液A;3)加入辛酸,静置,得到蛋清稀释液B;4)加入疏水性电荷诱导磁性微球,振荡,吸附卵清白蛋白;5)用稀释缓冲液多次清洗微球,得到吸附卵清白蛋白的疏水性电荷诱导磁性微球;6)加入洗脱缓冲液,振荡,收集卵清白蛋白溶液;7)冷冻干燥,得到纯度>98%的卵清白蛋白的固体产品。本发明所开发方法的特色在于设计了一条简单快速的分离工艺流程,可以从鸡蛋清中分离卵清白蛋白,方法的关键在于从鸡蛋清中直接分离卵清白蛋白,具有操作步骤简单,分离效率高的优点。