公开(公告)号：CN102382808A

公开(公告)日：2012-03-21

申请号：CN201110381424.3

申请日：2011-11-27

申请人： 甘肃华羚生物技术研究中心 ,  甘肃农业大学

发明人： 甘伯中 ,  高维东 ,  纪银莉 ,  宋礼 ,  何潇 ,  张玉平 ,  唐兴宇

IPC分类号： C12N9/58 ,  C12R1/645

摘要： 本发明涉及一种凝乳酶的制备方法，属生物工程和酶制剂制备技术领域。其主要特点包括如下步骤：（1）制备摇瓶摇瓶种子；（2）接种：液体菌种接种麸皮培养基；（3）发酵培养：33℃，培养48个小时；（4）浸提：物料用9%的盐水浸提过夜得粗酶液；（5）离心：粗酶液通过80000-10000rpm离心；（6）超滤：通过8k的超滤膜去除杂蛋白；（7）冷冻干燥：添加冷冻保护剂，真空冷冻干燥，得凝乳酶成品。本发明以麸皮为主要原料，原料价格低廉，操作工艺简单，发酵周期短，省时经济，降低了生产成本，适合工业化生产和推广。

公开(公告)号：CN102433316A

公开(公告)日：2012-05-02

申请号：CN201110381425.8

申请日：2011-11-27

申请人： 甘肃华羚生物技术研究中心 ,  甘肃农业大学

发明人： 甘伯中 ,  高维东 ,  纪银莉 ,  宋礼 ,  何潇 ,  张玉平 ,  唐兴宇

IPC分类号： C12N9/64

摘要： 本发明涉及一种蚓激酶干粉的制备方法，属于生物工程和酶制剂制备技术领域。一种蚓激酶干粉的制备方法，其主要特点是包括以下步骤：（1）清洗蚯蚓：（2）蚯蚓匀浆：（3）热变性：匀浆液放入50℃-55℃恒温水浴锅中，热变性0.8-1.2小时；（4）离心：变性后的匀浆液通过离心机5000-10000rpm离心8-10分钟，留上清液；（5）超滤：（6）真空冷冻干燥：超滤液进行真空冷冻干燥，冷冻时间2.5-3.5小时，冷冻温度-60℃以下，干燥真空度20pa以下，加热温度不超过50℃，干燥时间10-12小时，即可得到蚓激酶酶粉。本发明利用蛋白质在低盐浓度下溶解的方法，提取蚓激酶，与盐析沉淀蛋白质提取蚓激酶相比，酶活损失小，盐的用量小，提高了酶活，降低了成本。本发明利用蚓激酶的热稳定性，采用热变性法去除杂蛋白，进一步提高了蚓激酶的纯度，操作简单，效果明显，与对照相比酶活提高了1.7倍。

公开(公告)号：CN102382808B

公开(公告)日：2013-02-06

申请号：CN201110381424.3

申请日：2011-11-27

申请人： 甘肃华羚生物技术研究中心 ,  甘肃农业大学

发明人： 甘伯中 ,  高维东 ,  纪银莉 ,  宋礼 ,  何潇 ,  张玉平 ,  唐兴宇

IPC分类号： C12N9/58 ,  C12R1/645

摘要： 本发明涉及一种凝乳酶的制备方法，属生物工程和酶制剂制备技术领域。其主要特点包括如下步骤：（1）制备摇瓶摇瓶种子；（2）接种：液体菌种接种麸皮培养基；（3）发酵培养：33℃，培养48个小时；（4）浸提：物料用9%的盐水浸提过夜得粗酶液；（5）离心：粗酶液通过80000-10000rpm离心；（6）超滤：通过8k的超滤膜去除杂蛋白；（7）冷冻干燥：添加冷冻保护剂，真空冷冻干燥，得凝乳酶成品。本发明以麸皮为主要原料，原料价格低廉，操作工艺简单，发酵周期短，省时经济，降低了生产成本，适合工业化生产和推广。