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公开(公告)号：CN104569391A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201510049714.6
申请日：2015-01-30
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 广东大华农动物保健品股份有限公司
IPC分类号： G01N33/569
CPC分类号： G01N33/56983
摘要： 本发明公开了一种草鱼出血病病毒抗体ELISA检测试剂盒，属于兽用生物制品技术领域。本发明从胎牛血清中分离分子量小于30～100K的蛋白质、氨基酸等营养物质培养繁殖草鱼出血病病毒，繁殖后对草鱼出血病病毒采用孔径为30～100K的滤膜进行超滤，然后经过分子筛层析、阴离子交换层析、超滤进行进一步的纯化，获得高纯度的草鱼出血病病毒；进一步采用分子量大小为30～100K的酶解明胶蛋白作为ELISA板的封闭液封闭草鱼出血病病毒等步骤制备了诊断草鱼出血病病毒抗体的ELISA试剂盒。该试剂盒中ELISA板包被的草鱼出血病病毒纯度高，检测更灵敏；经过酶解胶原蛋白封闭、戊二醛固定、干燥后有效延长保存期。
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公开(公告)号：CN102533679A
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN201210049094.2
申请日：2012-02-28
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 广东大华农动物保健品股份有限公司
IPC分类号： C12N7/02 , A61K39/295 , C12R1/93
摘要： 本发明提供了一种病毒释放缓冲液及用所述病毒释放缓冲液提高胚液病毒滴度的方法，分别取所述病毒释放缓冲液和病毒胚液；将病毒胚液中速离心，分离沉淀一和上清液一；向所得沉淀中加入所述病毒释放缓冲液，混合均匀后，在2-8℃以1000-5000r/min的搅拌速率，搅拌10-30min，然后再次中速离心，分离沉淀二和上清液二；所得上清液二和所得上清液一混合后横向切流浓缩；或将所得上清液二和所得上清液一分别横向切流浓缩后混合；横向切流浓缩所用的滤膜的孔径为10-500KDa，胚液浓缩倍数为浓缩2-10倍；得到病毒胚液的浓缩液。该方法能够提高胚液禽类病毒的检测病毒滴度，处理病毒后能够提高病毒颗粒的稳定性，对病毒抗原没什么影响，且可大量处理胚液病毒，处理速度快。
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公开(公告)号：CN104946578A
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201510366100.0
申请日：2015-06-26
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 广东大华农动物保健品股份有限公司
IPC分类号： C12N5/02
摘要： 本发明提供一种单个细胞筛选的方法及其应用，具体地说，本发明提供一种单个细胞筛选的方法，包括初步分散、显微镜辅助分散、计数稀释、培养液配制和培养几大步骤，以消化分散后的贴壁细胞或悬浮细胞为对象，调节细胞在培养瓶中的浓度，以高效地筛选出大量的单个细胞，易于操作，对操作人员的操作经验没有要求，可在无菌条件下快速地获得大量的、无菌的、变异少的单个细胞，在新药筛选、疫苗制备、单克隆抗体制备上具有较大的应用推广价值。
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公开(公告)号：CN104711222A
公开(公告)日：2015-06-17
申请号：CN201510152418.9
申请日：2015-03-31
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 广东大华农动物保健品股份有限公司
IPC分类号： C12N5/078
摘要： 本发明涉及一种小鼠脾脏细胞的培养方法，具体涉及一种能够使小鼠脾脏细胞长期贴壁的培养方法，属于生命科学细胞培养技术领域。该培养方法包括如下步骤：1)分离脾脏细胞：无菌条件下取出小鼠脾脏，然后采筛网碾磨分离脾脏细胞，收集筛网滤出液；2)在细胞培养瓶中加入培养液，将步骤1)收集的筛网滤出液转移至细胞培养瓶中进行培养，培养时间为45～75天，培养过程中每隔15天更换培养基；4)当细胞长满细胞培养瓶时按照1：2的比例进行连续传代。该培养方法能够实现小鼠脾脏中贴壁细胞的连续传代，能够使小鼠脾脏细胞生长时间超过六个月。
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公开(公告)号：CN104630132A
公开(公告)日：2015-05-20
申请号：CN201510050944.4
申请日：2015-01-30
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 广东大华农动物保健品股份有限公司
IPC分类号： C12N5/071
CPC分类号： C12N5/0686 , C12N2500/30 , C12N2500/32 , C12N2500/84
摘要： 本发明涉及一种培养Marc-145细胞用的培养基，其由如下成分组成：DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清；所述DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清的体积比为：酶解明胶溶液：氨基酸DMEM溶液：胎牛血清：DMEM＝1-2:1-5:2-5:100。本发明还提供该培养基的制备方法：根据配方的体积比分别量取DMEM、酶解明胶溶液、氨基酸DMEM溶液和胎牛血清，混合，得到培养基。本发明的培养Marc-145细胞用的培养基，能够大幅降低Marc-145细胞培养过程中牛血清的使用量，降低了生产成本，同时制备方法简单、易操作。
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公开(公告)号：CN102533679B
公开(公告)日：2013-08-21
申请号：CN201210049094.2
申请日：2012-02-28
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 广东大华农动物保健品股份有限公司
IPC分类号： C12N7/02 , A61K39/295 , C12R1/93
摘要： 本发明提供了一种病毒释放缓冲液及用所述病毒释放缓冲液提高胚液病毒滴度的方法，分别取所述病毒释放缓冲液和病毒胚液；将病毒胚液中速离心，分离沉淀一和上清液一；向所得沉淀中加入所述病毒释放缓冲液，混合均匀后，在2-8℃以1000-5000r/min的搅拌速率，搅拌10-30min，然后再次中速离心，分离沉淀二和上清液二；所得上清液二和所得上清液一混合后横向切流浓缩；或将所得上清液二和所得上清液一分别横向切流浓缩后混合；横向切流浓缩所用的滤膜的孔径为10-500KDa，胚液浓缩倍数为浓缩2-10倍；得到病毒胚液的浓缩液。该方法能够提高胚液禽类病毒的检测病毒滴度，处理病毒后能够提高病毒颗粒的稳定性，对病毒抗原没什么影响，且可大量处理胚液病毒，处理速度快。
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公开(公告)号：CN103074357A
公开(公告)日：2013-05-01
申请号：CN201210298723.5
申请日：2012-08-20
申请人： 广东大华农动物保健品股份有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司
摘要： 本发明提供了外源基因在沙门氏菌中优化表达的方法，包括如下具体步骤：从NCBI数据库中统计获得沙门氏菌密码子使用频率表；分析各密码子使用频率：克隆或者合成目的基因，并且测定其核苷酸序列，根据上述沙门氏菌密码子使用频率表和氨基酸密码子对应表，在不改变氨基酸的情况下，通过分子突变或者基因合成的方式，把所述目的基因中沙门氏菌使用频率最低和较高的密码子突变成为使用频率最高的密码子，获得新的编码目的基因的核苷酸片段；通过分子生物学方法把新的编码目的基因的核苷酸片段插入到表达载体中，而后转入基因工程大肠杆菌，对获得的克隆进行鉴定；将鉴定正确的含目的基因的表达载体导入沙门氏菌中。
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公开(公告)号：CN104569391B
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201510049714.6
申请日：2015-01-30
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 广东大华农动物保健品股份有限公司
IPC分类号： G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种草鱼出血病病毒抗体ELISA检测试剂盒，属于兽用生物制品技术领域。本发明从胎牛血清中分离分子量小于30～100K的蛋白质、氨基酸等营养物质培养繁殖草鱼出血病病毒，繁殖后对草鱼出血病病毒采用孔径为30～100K的滤膜进行超滤，然后经过分子筛层析、阴离子交换层析、超滤进行进一步的纯化，获得高纯度的草鱼出血病病毒；进一步采用分子量大小为30～100K的酶解明胶蛋白作为ELISA板的封闭液封闭草鱼出血病病毒等步骤制备了诊断草鱼出血病病毒抗体的ELISA试剂盒。该试剂盒中ELISA板包被的草鱼出血病病毒纯度高，检测更灵敏；经过酶解胶原蛋白封闭、戊二醛固定、干燥后有效延长保存期。
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公开(公告)号：CN104560893A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201510050941.0
申请日：2015-01-30
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 广东大华农动物保健品股份有限公司
摘要： 本发明涉及一种用于培养病毒的培养基，包括培养液，其还包括：氨基酸溶液和胎牛血清中的小分子成分；所述培养液、氨基酸溶液和胎牛血清中的小分子成分按照体积百分数计分别为：培养液85-96％、氨基酸溶液2-5％、胎牛血清中的小分子成分2-10％。本发明还提供该培养基的制备方法：分别取配方量的培养液、氨基酸溶液和胎牛血清中的小分子成分，混合，得到产品。本发明的用于培养病毒的培养基，便于病毒繁殖结束后的病毒液的纯化，降低了疫苗生产成本；此外制备方法简单、易操作。
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公开(公告)号：CN104558166A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201510050935.5
申请日：2015-01-30
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 广东大华农动物保健品股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种减少抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体中非特异性抗体的方法，依次包括以下步骤:采用膜包对草鱼呼肠孤病毒进行浓缩；2)采用分子筛层析初步筛分草鱼呼肠孤病毒；3)采用离子交换层析纯化草鱼呼肠孤病毒；4)制备兔抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体；5)去除抗草鱼呼肠孤病毒多克隆抗体中的非特异性抗体。通过纯化的方法，提高草鱼出血病毒的纯度和滴度，减少其它非病毒蛋白所产生的非特异性多克隆抗体。通过多克隆抗体与CIK细胞碎片结合，除去部分多克隆抗体中的非特异性抗体。
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