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公开(公告)号：CN106086187B
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201610460402.9
申请日：2016-06-22
申请人： 西安交通大学 , 中国烟草总公司陕西省公司
IPC分类号： C12Q1/6844
摘要： 过氧化氢消除核酸恒温扩增检测汞离子时DTT干扰的方法，将含有错配位点并具有引发核酸恒温扩增的引物和模板的识别序列按浓度100nM等体积混合，识别序列结合待测的含汞溶液中汞离子之后可形成可被聚合酶识别的稳定杂交结构；将稳定杂交结构与过氧化氢溶液、扩增底物、DNA聚合酶KF、SYBR GreenⅠ、以及扩增反应缓冲液混合反应，在聚合酶作用下引发扩增反应，产生双链DNA；SYBR GreenⅠ能够特异性结合在双链DNA分子上，同时发出荧光信号；利用溶解曲线和琼脂糖凝胶电泳对扩增后序列进行表征，证实过氧化氢消除了DTT干扰，本发明消除DTT对痕量汞离子检测的干扰，具有良好的体系兼容性，同时操作简便，不依赖于复杂设备。
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公开(公告)号：CN106086187A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610460402.9
申请日：2016-06-22
申请人： 西安交通大学 , 中国烟草总公司陕西省公司
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 过氧化氢消除核酸恒温扩增检测汞离子时DTT干扰的方法，将含有错配位点并具有引发核酸恒温扩增的引物和模板的识别序列按浓度100nM等体积混合，识别序列结合待测的含汞溶液中汞离子之后可形成可被聚合酶识别的稳定杂交结构；将稳定杂交结构与过氧化氢溶液、扩增底物、DNA聚合酶KF、SYBR GreenⅠ、以及扩增反应缓冲液混合反应，在聚合酶作用下引发扩增反应，产生双链DNA；SYBR GreenⅠ能够特异性结合在双链DNA分子上，同时发出荧光信号；利用溶解曲线和琼脂糖凝胶电泳对扩增后序列进行表征，证实过氧化氢消除了DTT干扰，本发明消除DTT对痕量汞离子检测的干扰，具有良好的体系兼容性，同时操作简便，不依赖于复杂设备。
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公开(公告)号：CN103305612B
公开(公告)日：2015-01-07
申请号：CN201310218918.9
申请日：2013-06-04
申请人： 西安交通大学 , 中国烟草总公司陕西省公司
摘要： 本发明公开了一种基于恒温级联核酸扩增的铅离子检测试剂盒及其检测方法，通过脱氧核酶识别铅离子，并结合链置换扩增与单链触发的DNA分子机器实现恒温级联核酸扩增，将铅离子浓度转化为显著放大的荧光检测信号，从而精确测定微量铅离子浓度。本发明相对于基于脱氧核酶的其他方法相比更加快速，灵敏度更高；且对设备的要求更低，操作更加简单。
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公开(公告)号：CN106086188B
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201610460403.3
申请日：2016-06-22
申请人： 西安交通大学 , 中国烟草总公司陕西省公司
IPC分类号： C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 基于核酸恒温扩增技术检测汞离子的DNA结构探针，包括含错配位点并能通过核酸杂交构成三重杂交结构的三条DNA结构探针的核酸序列，三重杂交结构特点是：由汞离子触发DNA探针结构杂交形成，在空间上隔了汞离子结合区域与聚合酶识别区域，利用聚合酶的快速聚合作用，在生物硫醇分子破坏汞离子与胸腺嘧啶作用前获得可持续聚合的稳定结构，巧妙的回避了生物硫醇分子的干扰。该方法可有效消除微量汞离子在应用核酸恒温方法检测时由于生物硫醇分子的干扰而造成的损失，在不引入任何试剂的前提下，有效提高痕量汞离子的检测效率，同时进一步提高核酸恒温扩增技术在汞离子检测中的应用。
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公开(公告)号：CN105256033B
公开(公告)日：2019-01-29
申请号：CN201510696810.X
申请日：2015-10-22
申请人： 西安交通大学 , 中国烟草总公司陕西省公司
IPC分类号： C12Q1/6844
摘要： 基于恒温级联核酸扩增的汞离子检测试剂盒及其检测方法，含有胸腺嘧啶的DNA识别元件特异性的结合汞离子后折叠并形成分子内茎环结构；DNA的3’端可以被聚合酶识别，以自身为模板起始链置换扩增反应，产生大量的单链DNA产物；该单链DNA可以打开含有酶切位点的分子信标茎环结构，产生荧光信号；同时，单链DNA产物还可以作为引物，以所杂交结合的分子信标为模板触发二次链置换扩增反应，而被释放后的SDA产物可与新的分子信标形成杂交双链，以产生级联放大的荧光信号，该测量方法灵敏度高，在无需增加体系复杂度的条件下，巧妙的实现了链置换扩增反应的级联放大，扩增效率高，反应速度快，可在30min内实现汞离子的定量，检测限低至2nM。
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公开(公告)号：CN106086188A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610460403.3
申请日：2016-06-22
申请人： 西安交通大学 , 中国烟草总公司陕西省公司
摘要： 基于核酸恒温扩增技术检测汞离子的DNA结构探针，包括含错配位点并能通过核酸杂交构成三重杂交结构的三条DNA结构探针的核酸序列，三重杂交结构特点是：由汞离子触发DNA探针结构杂交形成，在空间上隔了汞离子结合区域与聚合酶识别区域，利用聚合酶的快速聚合作用，在生物硫醇分子破坏汞离子与胸腺嘧啶作用前获得可持续聚合的稳定结构，巧妙的回避了生物硫醇分子的干扰。该方法可有效消除微量汞离子在应用核酸恒温方法检测时由于生物硫醇分子的干扰而造成的损失，在不引入任何试剂的前提下，有效提高痕量汞离子的检测效率，同时进一步提高核酸恒温扩增技术在汞离子检测中的应用。
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公开(公告)号：CN105256033A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510696810.X
申请日：2015-10-22
申请人： 西安交通大学 , 中国烟草总公司陕西省公司
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6844
摘要： 基于恒温级联核酸扩增的汞离子检测试剂盒及其检测方法，含有胸腺嘧啶的DNA识别元件特异性的结合汞离子后折叠并形成分子内茎环结构；DNA的3’端可以被聚合酶识别，以自身为模板起始链置换扩增反应，产生大量的单链DNA产物；该单链DNA可以打开含有酶切位点的分子信标茎环结构，产生荧光信号；同时，单链DNA产物还可以作为引物，以所杂交结合的分子信标为模板触发二次链置换扩增反应，而被释放后的SDA产物可与新的分子信标形成杂交双链，以产生级联放大的荧光信号，该测量方法灵敏度高，在无需增加体系复杂度的条件下，巧妙的实现了链置换扩增反应的级联放大，扩增效率高，反应速度快，可在30min内实现汞离子的定量，检测限低至2nM。
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公开(公告)号：CN103305612A
公开(公告)日：2013-09-18
申请号：CN201310218918.9
申请日：2013-06-04
申请人： 西安交通大学 , 中国烟草总公司陕西省公司
摘要： 本发明公开了一种基于恒温级联核酸扩增的铅离子检测试剂盒及其检测方法，通过脱氧核酶识别铅离子，并结合链置换扩增与单链触发的DNA分子机器实现恒温级联核酸扩增，将铅离子浓度转化为显著放大的荧光检测信号，从而精确测定微量铅离子浓度。本发明相对于基于脱氧核酶的其他方法相比更加快速，灵敏度更高；且对设备的要求更低，操作更加简单。
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