公开(公告)号：CN112226418B

公开(公告)日：2022-07-08

申请号：CN202011027051.5

申请日：2020-09-25

申请人： 阜外华中心血管病医院

发明人： 周豪杰 ,  王晨旭 ,  高传玉 ,  张守涛 ,  马强

IPC分类号： C12N7/02 ,  C12N7/00

摘要： 本发明涉及一种重组腺相关病毒纯化方法。其主要包括第Ⅰ轮高pH（7.3～8.3）下的除杂纯化和第Ⅱ轮低pH（4.0～4.5）下的病毒吸附及严格密集梯度洗脱的进一步纯化。SDS‑PAGE结果表明病毒纯化效果显著，第Ⅰ轮纯化除去了大量的蛋白杂质，第Ⅱ轮纯化也明显除去部分杂质；WB和电镜结果证明，纯化产物实为rAAV病毒且滴度满足需要，而且镜检表明包含基因的实心颗粒占比可达99%。本发明纯化方法简单方便、能有效去除空壳病毒，提高包含基因的实心病毒占比，且易于实现rAAV的大规模纯化，为rAAV相关的临床研究和药物开发奠定了基础。

公开(公告)号：CN112226418A

公开(公告)日：2021-01-15

申请号：CN202011027051.5

申请日：2020-09-25

申请人： 阜外华中心血管病医院

发明人： 周豪杰 ,  王晨旭 ,  高传玉 ,  张守涛 ,  马强

IPC分类号： C12N7/02 ,  C12N7/00

摘要： 本发明涉及一种重组腺相关病毒纯化方法。其主要包括第Ⅰ轮高pH（7.3～8.3）下的除杂纯化和第Ⅱ轮低pH（4.0～4.5）下的病毒吸附及严格密集梯度洗脱的进一步纯化。SDS‑PAGE结果表明病毒纯化效果显著，第Ⅰ轮纯化除去了大量的蛋白杂质，第Ⅱ轮纯化也明显除去部分杂质；WB和电镜结果证明，纯化产物实为rAAV病毒且滴度满足需要，而且镜检表明包含基因的实心颗粒占比可达99%。本发明纯化方法简单方便、能有效去除空壳病毒，提高包含基因的实心病毒占比，且易于实现rAAV的大规模纯化，为rAAV相关的临床研究和药物开发奠定了基础。