公开(公告)号：CN114891745A

公开(公告)日：2022-08-12

申请号：CN202210544433.8

申请日：2022-05-18

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 孙旭东 ,  徐闯 ,  董志昊 ,  贾红豆 ,  常仁旭 ,  高爽 ,  董昊 ,  宋倩

IPC分类号： C12N5/0786 ,  G01N33/569

摘要： 本发明的一种分离、纯化奶牛血液中CD14+单核细胞的方法，包括以下步骤：采集血液收集到抗凝管；使用稀释液进行同比例稀释，置于单个核细胞分离液上方离心并收集白膜层；加入红细胞裂解液裂解红细胞；加入清洗液清洗，离心后收集沉淀，细胞计数后加入CD14+一抗孵育；再加入磁珠二抗孵育；最后磁柱分选CD14+单核细胞。本申请首次介绍了奶牛血液中CD14+单核细胞分离和纯化方法以及分选柱重复利用办法，补充了该领域试验方法技术的空白。以该方法获得的奶牛CD14+单核细胞具有操作简单，活性好，纯度高的特点。因单核细胞是先天免疫反应和后天免疫充当“哨兵”细胞，故其在奶牛科学研究和临床免疫疾病预警方面，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN113481220A

公开(公告)日：2021-10-08

申请号：CN202110992389.2

申请日：2021-08-27

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 孙旭东 ,  徐闯 ,  李卓 ,  姜春晖 ,  董志昊 ,  常仁旭 ,  罗胜缤 ,  唐燕 ,  宋倩 ,  高爽 ,  董昊 ,  王旋

IPC分类号： C12N15/53 ,  C12Q1/6888

摘要： 本发明涉及一种奶牛血液中与酮病相关的编码基因CYP1A1，其核苷酸序列如SEQID NO.1所示。本发明还涉及了与酮病相关的编码基因CYP1A1的PCR检测试剂盒以及该试剂盒的用途。本发明通过广泛而深入的研究，检测出了在酮病奶牛血液中存在CYP1A1基因，即酮病奶牛血液中含有93bp核苷酸序列的CYP1A1基因，以特异性引物通过PCR技术验证了CYP1A1基因在奶牛机体不同状态下的含量；本发明的试剂盒能用于快速高通量的检测出奶牛血液中CYP1A1基因，可作为奶牛酮病氧化应激传统检测的辅助方法，并为奶牛酮病氧化应激的检测与实验室诊断提供了简单快速、重复性好的新方法。

公开(公告)号：CN113481221A

公开(公告)日：2021-10-08

申请号：CN202110992400.5

申请日：2021-08-27

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 徐闯 ,  孙旭东 ,  李卓 ,  姜春晖 ,  董志昊 ,  常仁旭 ,  罗胜缤 ,  唐燕 ,  宋倩 ,  高爽 ,  董昊 ,  王旋

IPC分类号： C12N15/53 ,  C12Q1/6888

摘要： 本发明涉及一种奶牛血液中与酮病相关的编码基因SOD，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。本发明还涉及了用于快速检测奶牛血液中与酮病相关的编码基因SOD的PCR检测试剂盒以及该试剂盒的用途。本发明通过广泛而深入的研究，检测出了在酮病奶牛血液中存在SOD基因，即酮病奶牛血液中含有143bp核苷酸序列的SOD基因，以特异性引物通过PCR技术验证了SOD基因在奶牛机体不同状态下的含量；本发明的试剂盒能用于快速高通量的检测出奶牛血液中SOD基因，可作为奶牛酮病氧化应激传统检测的辅助方法，并为奶牛酮病氧化应激的检测与实验室诊断提供了简单快速、重复性好的新方法。