소수성 상호작용 부위내에 전기적 상호작용이 도입된 단백질 및 이의 제조방법
    48.
    发明申请
    소수성 상호작용 부위내에 전기적 상호작용이 도입된 단백질 및 이의 제조방법 审中-公开
    在互动交互场所介绍的电气互动中的蛋白质及其制备方法

    公开(公告)号:WO2014142591A1

    公开(公告)日:2014-09-18

    申请号:PCT/KR2014/002139

    申请日:2014-03-13

    发明人: 김호언

    IPC分类号: C07K19/00 C07K16/46

    摘要: 본 발명은 에 관한 것으로, 단백질의 소수성 상호작용을 하는 부위내에서 선택된 한쌍의 소수성 아미노산에서, 하나의 소수성 아미노산이 포지티브 전하를 가진 물질로, 다른 소수성 아미노산이 네가티브 전하를 가진 물질로 변형되어 상기 포지티브 전하와 상기 네가티브 전하에 의해 단백질의 소수성 상호작용 부위내에 전기적 상호작용이 도입된 단백질 또는 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 상기 단백질 또는 항체를 제조한 방법, 상기 항체를 이용하여 무거운 사슬과 가벼운 사슬의 짝지음 정도를 측정하는 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 단백질 또는 항체는 동형이중체 또는 모노머에 의한 오염이 적어서, 높은 순도로 이종성이중체(heterodimer)을 얻을 수 있다.

    摘要翻译: 本发明提供一种蛋白质或抗体,其中选自蛋白质的疏水相互作用位点内的一对疏水性氨基酸中的一个疏水性氨基酸被转化为具有正电荷的物质,另一个疏水性氨基酸为 转化成具有负电荷的物质,并且通过正电荷和负电荷将电相互作用引入蛋白质的疏水相互作用位点内。 本发明还提供了制备蛋白质或抗体的方法,以及使用该抗体测量重链和轻链之间的偶联程度的方法。 根据本发明的蛋白质或抗体具有低同型二聚体或单体的低污染性,从而可以获得高纯度的异二聚体。

    METHODS FOR THE PRODUCTION OF LIBRARIES FOR DIRECTED EVOLUTION
    49.
    发明申请
    METHODS FOR THE PRODUCTION OF LIBRARIES FOR DIRECTED EVOLUTION 审中-公开
    生产图书馆用于指导演示的方法

    公开(公告)号:WO2014134166A1

    公开(公告)日:2014-09-04

    申请号:PCT/US2014018672

    申请日:2014-02-26

    申请人: AXIOMX INC

    摘要: Disclosed herein is an efficient method of generating a library of variants of a sequence of interest, such as may be used in directed evolution, in one embodiment, the method includes an amplification reaction, e.g. error-prone PCR, to generate double-stranded DNA (dsDNA) variants of a sequence of interest, after which one strand of the dsDNA variants may be selectively degraded to produce single-stranded DNA (ssDNA) variants. The ssDNA variants may be hybridized to ssDNA intermediaries, e.g., uracilated circular ssDNA intermediaries, to form heteroduplex DNA, which may be transformed into cells, such as E. coli cells, yielding a library of variants. This method eliminates the inefficient sub-cloning steps and the need for costly primer sets required by many prior methods.

    摘要翻译: 本文公开的是在一个实施方案中产生感兴趣序列的变体文库的有效方法,例如可用于定向进化,该方法包括扩增反应,例如, 易发生PCR,产生目的序列的双链DNA(dsDNA)变体,之后可以选择性降解一条dsDNA变体以产生单链DNA(ssDNA)变体。 ssDNA变体可以与ssDNA中间体例如尿嘧啶环状ssDNA中间体杂交以形成异源双链DNA,其可以转化到细胞如大肠杆菌细胞中,产生变体文库。 该方法消除了低效的亚克隆步骤以及许多现有方法所需的昂贵的引物组的需要。