公开(公告)号：WO2014084672A1

公开(公告)日：2014-06-05

申请号：PCT/KR2013/011022

申请日：2013-11-29

Applicant: (주)바이오니아

Inventor： 박한오 ,  김종갑 ,  한지원 ,  조유상 ,  김민정 ,  김하늘 ,  이양원 ,  김남일

IPC: C12M1/38 ,  C07K1/22

CPC classification number: C12M29/04 ,  C07K1/02 ,  C07K1/047 ,  C07K1/22 ,  C07K1/36 ,  C12M23/08 ,  C12M23/12 ,  C12M23/38 ,  C12M29/00 ,  C12M33/04 ,  C12M41/12 ,  C12M47/12 ,  C12P21/00

Abstract: 본 발명은 전자동 무세포 단백질 제조장비 및 이를 이용한 단백질의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 상부가 개방된 구조로 투석막을 구비한 다수의 투석튜브로 이루어진 것을 특징으로 하는 반응용기를 포함하는 단백질발현반응부; 상기 반응용기를 가열 또는 냉각하는 반응온도조절부; 복수개의 피펫을 포함하며, 상기 피펫을 이용하여 용액을 흡입 또는 토출할 수 있는 피펫어레이; 상기의 피펫어레이를 상하, 전후 또는 좌우로 이동시켜 용액들을 이동시킬 수 있는 피펫어레이 이동부; 자기장인가장치를 구비한 단백질정제부; 및 단백질 제조에 사용되는 용액을 공급하는 멀티웰 플레이트 키트를 장착할 수 있는 멀티웰 플레이트 장착부;를 포함하는 것을 특징으로 하는 전자동 무세포 단백질 제조장비 및 이를 이용한 단백질의 제조방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 친화성 태그가 결합된 목표 단백질 이외에도 친화성 태그(Tag)가 제거된 순수 목표 단백질의 합성 기능을 가지고 있으며, 최종 정제된 단백질이 녹아 있는 용출용액을 원하는 단백질 보관용 완충용액으로 다단계 투석을 통해 빠르게 원하는 완충용액으로 자동으로 교환하는 기능도 가지고 있어 다수의 단백질들을 전자동으로 간편하게 대량 제조할 수 있는 전자동 단백질 제조장비 및 제조방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 단백질 제조에 필요한 용액이 저장되는 멀티웰 플레이트 키트 및 투석막을 구비한 투석튜브를 포함하는 전자동 무세포 단백질 제조용 반응 키트에 관한 것이다. 본 발명에 따른 전자동 무세포 단백질 제조장비는 전자동으로 목표단백질을 발현하여 정제할 뿐만 아니라, 단백질 보관용 완충용액에 투석할 수 있기 때문에최종 제조된 단백질을 바로 사용할 수 있는 장점이 있다. 또한, 본 발명에 따른 단백질 제조방법은 다단계로 저분자발현용액을 교환하여 무세포 단백질 발현에 필요한 에너지원 등을 지속적으로 공급해줄 수 있어, 종래의 배치 형태의 무세포 단백질 제작법을 사용하여 목표 단백질을 얻는 경우에 비해 최대 5배 양을 획득할 수 있으며, 자성입자를 이용한 목표 단백질 정제시 단백질 분해효소를 이용하여 불필요한 친화성 태그를 제거하여 순수한 목표 단백질을 제조할 수 있기 때문에, 산업, 의료 및 연구 목적의 단백질 생산에 있어서, 단백질 활성 및 구조에 부정적 영향을 미칠 수 있는 인공서열이 제거된 원형의 단백질을 생산할 수 있다는 점에서 매우 유용하다.

Abstract translation: 本发明涉及一种用于自动制备无细胞蛋白的装置和使用其的蛋白质的制备方法，更具体地，涉及一种用于自动制备无细胞蛋白质的装置和使用该装置制造蛋白质的方法。 包括：蛋白质表达反应单元，其包括反应容器，所述反应容器包括通过开放的上部结构设置有透析膜的多个透析管; 用于加热或冷却蛋白质表达反应单元的反应温度控制单元; 移液管阵列，其包括多个移液管并且能够通过使用移液管吸引或排出溶液; 移液器阵列移动单元，能够通过上下移动移液管来移动解决方案，左右移动; 设置有磁场施加装置的蛋白质纯化单元; 以及能够提供用于制备蛋白质的溶液的多孔板试剂盒的多孔板提供单元。 另外，本发明涉及一种自动制备无细胞蛋白的装置及其制备方法，其具有除去亲和标签偶联的靶蛋白以外的除去亲和标签的纯靶蛋白质合成功能 ，以及通过所需的洗脱溶液通过多步透析，将所得纯化蛋白质溶解的浸出溶液与用于含有蛋白质的所需洗脱溶液快速自动交换的功能，使得多种蛋白质可以 简单自动地准备好。 此外，本发明涉及一种用于自动制备无细胞蛋白质的反应试剂盒，其包括：用于储存制备蛋白质所必需的溶液的多孔板试剂盒; 以及设置有透析膜的透析管。 根据本发明的用于自动制备无细胞蛋白质的装置可以自动表达和纯化目标蛋白质，并且透析缓冲液中的蛋白质以含有蛋白质，从而能立即使用所得到的纯化蛋白质。 此外，根据本发明的蛋白质的制备方法可以通过多层交换低分子量表达溶液来连续提供无细胞蛋白质表达所需的能量源，使得与 通过使用以排列形式制备无细胞蛋白的常规方法获得靶蛋白，并且由于通过使用磁性颗粒纯化靶蛋白时通过使用蛋白酶去除不需要的亲和标签来制备纯的靶蛋白，本发明是非常有用的 在用于工业，药物和研究目的的蛋白质生产中，其中可以产生环状蛋白质，其中除去对蛋白质的活性和结构产生负面影响的人造序列。

公开(公告)号：WO2013032174A2

公开(公告)日：2013-03-07

申请号：PCT/KR2012/006715

申请日：2012-08-23

Applicant: (주)바이오니아 ,  박한오 ,  조유상 ,  정준호 ,  한지원 ,  김남일

Inventor： 박한오 ,  조유상 ,  정준호 ,  한지원 ,  김남일

IPC: C07K1/32 ,  C07K1/14 ,  C12N15/09 ,  C12M1/18

CPC classification number: C12P21/00 ,  B01J19/0046 ,  B01J2219/00315 ,  B01J2219/00364 ,  B01J2219/00459 ,  B01J2219/00495 ,  C07K1/22 ,  C12P21/02

Abstract: 본 발명은 단백질의 생산방법에 관한 것으로，상기 본 발명에 따른 단백질 생산방법은 본 발명의 멀티 웰 플레이트 키트 및 히팅부와 자기장 인가부를 구비한 생물학적 물질 자동정제 장치를 이용함으로써 기존의 종래의 세포배양을 통한 단백질 발현 / 추출 방법을 사용하여 목적 단백질을 얻는 경우에 비해 다수의 단백질을 신속하고 간편하게 획득할 수 있으며，반응 웰 사이의 편차가 없어 동일 단백질에 대해서 재현성 있는 합성 효율을 얻을 수 있다는 장점이 있다.

Abstract translation: 本发明涉及生产蛋白质的方法，其中根据本发明的用于生产蛋白质的方法是本发明的多孔板试剂盒，具有加热单元和磁场施加单元的自动生物材料纯化设备 与通过使用常规细胞培养的常规蛋白质培养/表达方法获得目标蛋白质的情况相比，可以快速且容易地获得大量蛋白质，并且反应孔之间没有偏差， 获得合成效率是有利的。