本发明提供一种甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力测试方法。彻底取代了传统的小鼠体内相对效力测试方法，解决了使用动物所带来的影响因素多、重复性差、检定周期长达30余天的不利因素，只需约3.5小时即可完成测试，减少了疫苗库存量，间接延长了疫苗的有效期，降低了劳动强度，尤其在疫苗紧张时可多生产150-200万支疫苗，可创产值4500-6000万元。另外，本发明采用双平行线生物检定原理，提出的甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力测试方法，使HAV病毒含量与相对应A值的对数之间表现出良好的线性回归，R2均在0.97以上；检测结果表现出较好的稳定性及重复性，因此，是一种方便、快捷、可靠的测试方法。