钝齿棒杆菌N-乙酰谷氨酸激酶突变提高精氨酸产量的方法
摘要:
L-精氨酸是人体内所需半必需碱性氨基酸之一,具有多种独特的生理和药理作用。高产精氨酸突变菌株C.crenatum SYPA5-5以循环途径合成精氨酸,乙酰谷氨酸激酶(NAGK)是其合成途径中关键酶,受到产物精氨酸的反馈抑制。利用重叠PCR技术用编码天冬氨酸的GAT密码子取代了编码NAGK蛋白中287位的甘氨酸的GGA密码子,突变后获得高活性且受精氨酸的反馈抑制作用明显降低的NAGK。将argBSD基因通过pJCl-tac引入高产精氨酸的钝齿棒杆菌中,进一步提高关键酶的表达量。最终产酸水平由原来的28g/L提高至36.3g/L,L-精氨酸产量提高了29.7%。
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