本发明公开了一种梨果实内韧皮部同化物卸载路径的荧光示踪方法，步骤包括：荧光溶液的配制、荧光溶液的引入、采样、制备切片、观察拍照等过程，为研究果实内糖的转运提供了有效的方法。本发明以5(6)羧基荧光素酯(5(6)-carboxyfluoresein diacetate，CFDA)作为荧光示踪物质，在不需要专门设备和装置的条件下，通过果柄部位将CFDA溶液引入韧皮部，达到快速、有效地标记梨果实发育过程中韧皮部同化物卸载路径的目的。该方法的优点是不需要特殊的装置、操作简单、不易伤及木质部且荧光溶液不易蒸发，在荧光观察过程中不需样品的特殊处理、成本低廉。