一种温敏型磁性蛋白质印迹纳米球的制备方法，用水热法合成粒径为200nm的磁性纳米球；通过凝胶-溶胶法在上述磁性纳米球表面包覆一层厚度为20nm的硅层；将包硅的磁性纳米球、功能单体、模板分子和交联剂加入到Tris-HCl缓冲液中，得到反应液；将上述反应液在一定温度下进行聚合反应，得到聚合物；用洗脱液洗脱上述聚合物，即可制得温敏型磁性蛋白质印迹纳米球。本发明的优点是：该温敏型磁性蛋白质印迹纳米球将分子印迹的专一识别性、磁性纳米球在外界磁场下迅速分离的特性和温敏材料的温度响应性相结合，制备过程简单、条件温和、价格低廉，为复杂生物体系中高丰度蛋白质组分的选择性去除和富集提供了一种新的可行性方法。