本发明属于植物保护技术领域，具体涉及一种室内高效稳定的稻曲病菌人工接种方法及专用菌株。发明的方法包括：通过PSB振荡培养1块在PSA上培养7天的菌丝块(6mm)7-10天制备菌丝孢子混合液，4层纱布过滤后获得106个/ml孢子液接种体；在水稻幼穗分化第七期以注射方式接种水稻穗苞；25℃、95％RH条件下保湿3天后置于25-32℃、90％-98％RH的喷灌网室内培养。采用本发明可使稻曲病人工接种病穗率达到90％以上，与室外的人工接种技术相比，本发明能够在可控的条件下获得高效的稳定的稻曲病发病率。