本发明提供一种胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法和应用，所述突变体串联多肽由胰高血糖素样肽-1突变体C末端添加的Cys串联Exendin-4(31-39)而成，并且所述突变体串联多肽自身折叠成二硫键，所述胰高血糖素样肽-1突变体多肽具有SEQ ID NO 1所示的序列在氨基酸残基第9位Asp、16位Gly或27位Val发生点突变为Cys，并在C末端添加Cys所产生的氨基酸序列，所述Exendin-4(31-39)具有SEQ ID NO 5所示的氨基酸序列；所述胰高血糖素样肽-1突变体串联多肽用于制备治疗糖尿病、治疗和/或预防肥胖症的药物组合物。