本发明提供了一种利用原生质体转化技术对黑根霉（Rhizopus nigericans）进行外源基因的遗传转化方法：利用真菌细胞壁降解酶对黑根霉（Rhizopus nigericans）的细胞壁进行处理，得到原生质体并进行纯化，以潮霉素B作为选择标记，首次将来自米根霉NADPH-细胞色素P450还原酶CYPOR（缩写：CPR基因）基因采用原生质体转化方法导入黑根霉中，获得工程菌。本发明的有益效果体现在：可以用于黑根霉的分子生物学研究，如研究该菌P450酶系基因对甾体化合物羟化作用的分子机制等；可以用来对黑根霉实施基因工程从而进行遗传改良育种，提高黑根霉对甾体底物羟化转化率。