本发明公开了一种查耳酮类化合物及其制备方法和应用。所述的查耳酮类化合物是从肾叶山蚂蝗中分离得到，其分子式为C20H20O5，具有下述结构：所述查耳酮类化合物的制备方法，是以肾叶山蚂蝗全株为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离步骤，具体为：将肾叶山蚂蝗全株粉碎后以甲醇超声提取，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏；浸膏用硅胶干法装柱进行硅胶柱层析；以体积配比为1:0~1:2的氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱；洗脱液的8:2部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得所述的查耳酮类化合物。本发明经试验证明，对烟草花叶病毒具有较好的细胞活性。本发明化合物结构简单，人工合成容易实现，化合物的活性好，可作为抗烟草花叶病毒的先导性化合物。