本发明公开了一种检测猪血清中伪狂犬病病毒gE蛋白抗体的试纸卡及其制备方法和应用，试纸卡是由免疫胶体金试纸条和卡体组成。免疫胶体金试纸条是将硝酸纤维素膜粘贴在纸条底板上，在硝酸纤维膜的一端粘贴有金标结合垫和样品垫，硝酸纤维素膜的另一端粘贴有吸水垫；硝酸纤维膜上设有包被有猪伪狂犬病病毒鄂A株的检测线和包被有羊抗鼠IgG质控线，检测线与质控线相互平行，检测线靠近金标结合垫一端，质控线靠近吸水垫一端。免疫胶体金试纸条放置于试纸卡的卡体中，检测线和质控线设置在其检测窗孔所对应的位置。该试纸卡用于猪血清中伪狂犬病病毒gE蛋白抗体的快速检测，其结构简单，操作方便，灵敏度高、结果清晰。