本发明提供一种黄绿蜜环菌中染料木素单体化合物的提取方法：以黄绿蜜环菌子实体为原料，磨成粉末后乙酸乙酯提取，浓缩至膏状；用正己烷‑乙醇溶剂溶；一维液相色谱分离：采用Silica色谱柱，A相正己烷、B相乙醇二元流动相，B相浓度由0％至75％梯度洗脱，收集26‑29min洗脱液；用乙醇‑正己烷溶剂溶解；二维液相色谱分离：采用Silica色谱柱，A相正己烷、B相乙醇二元流动相，B相浓度2％等度洗脱，收集8‑11min洗脱液，蒸发浓缩，得染料木素。该分离方法稳定，重复性高，制备量大，操作简单省时，成本低，染料木素提取率高；目的物对肺癌A549细胞和肝癌Hep‑G2细胞具有抑制作用，具有抗癌药物开发潜力。