本发明公开了一种生产反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的工程菌及其构建方法与应用。本发明所提供的工程菌的构建方法，包括A1)和A2)：A1)向受体细胞中导入L‑脯氨酸‑4‑羟化酶基因、谷氨酸‑5‑激酶基因和谷氨酸‑5‑半醛脱氢酶基因；A2)为将受体细胞的α－酮戊二酸脱氢酶基因、异柠檬酸裂解酶基因或脯氨酸脱氢酶基因敲除、或用乙酰辅酶A合成酶基因替换受体细胞的丙酮酸氧化酶基因；利用重组细胞与底物进行反应得到反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸。实验证明，可以利用本发明的反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的生产方法生产反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸。