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公开(公告)号：CN111778200B
公开(公告)日：2022-11-01
申请号：CN201910270484.4
申请日：2019-04-04
申请人： 中国科学院微生物研究所
摘要： 本发明公开了生产L‑天冬氨酸的平台菌、基于该平台菌构建的生产β‑丙氨酸的重组菌及其构建方法。通过改变大肠杆菌的葡萄糖摄入途径及糖酵解途径使磷酸烯醇式丙酮酸大量积累，进而增强固碳途径以获得大量的前体物质草酰乙酸，加强L‑天冬氨酸合成途径相关基因靶点，通过引入辅因子循环系统解决共底物不足的问题，并改造中心代谢途径三羧酸循环以及敲除副产物竞争旁路，从而获得平台菌；基于该平台菌通过增强天冬氨酸脱羧酶的表达，获得重组菌。平台菌能够合成50.10±2.10mM L‑asp，转化率达到1.00M/M葡萄糖；重组菌能够合成76.01±2.80mM β‑丙氨酸，转化率为1.52M/M葡萄糖。本发明具有重要应用价值。
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公开(公告)号：CN111100831B
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN201811252374.7
申请日：2018-10-25
申请人： 中国科学院微生物研究所
摘要： 本发明公开了产左旋肉碱的重组菌及其构建方法与应用。本发明的重组菌是将γ‑丁基甜菜碱羟化酶基因和肉碱转运蛋白基因导入受体菌得到产左旋肉碱的重组菌或将γ‑丁基甜菜碱羟化酶基因导入受体菌得到产左旋肉碱的重组菌；所述受体菌为突变型大肠杆菌或野生型大肠杆菌。本发明在大肠杆菌中实现了左旋肉碱的生产，并通过代谢工程手段提高了左旋肉碱的产量。
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公开(公告)号：CN113025542A
公开(公告)日：2021-06-25
申请号：CN201911362098.4
申请日：2019-12-25
申请人： 中国科学院微生物研究所
摘要： 本发明公开了一种产L‑谷氨酰胺的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。本发明首先公开了重组大肠杆菌，其与作为出发菌的大肠杆菌相比，谷氨酰胺合成酶的基因的表达量和/或含量和/或活性增加，和/或下述蛋白质的基因的表达量和/或含量和/或活性降低；所述蛋白质为如下至少一种：谷氨酰胺酶A；谷氨酰胺酶B；同时具备谷氨酰胺合成酶腺嘌呤转移酶活性和谷氨酰胺合成酶去腺苷化活性的双功能酶；肉豆蔻酰载体蛋白依赖性酰基转移酶；PII‑1蛋白。进一步提供了制备L‑谷氨酰胺的方法。本发明通过在大肠杆菌中过表达谷氨酰胺合成酶的基因，同时阻断旁路途径，开发了一套以L‑谷氨酸为底物高效合成游离L‑谷氨酰胺的方法。
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公开(公告)号：CN106086102B
公开(公告)日：2020-10-27
申请号：CN201610248615.5
申请日：2016-04-20
申请人： 中国科学院微生物研究所
摘要： 本发明公开了一种生产反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的工程菌及其构建方法与应用。本发明所提供的工程菌的构建方法，包括A1)和A2)：A1)向受体细胞中导入L‑脯氨酸‑4‑羟化酶基因、谷氨酸‑5‑激酶基因和谷氨酸‑5‑半醛脱氢酶基因；A2)为将受体细胞的α－酮戊二酸脱氢酶基因、异柠檬酸裂解酶基因或脯氨酸脱氢酶基因敲除、或用乙酰辅酶A合成酶基因替换受体细胞的丙酮酸氧化酶基因；利用重组细胞与底物进行反应得到反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸。实验证明，可以利用本发明的反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的生产方法生产反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸。
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公开(公告)号：CN111778200A
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN201910270484.4
申请日：2019-04-04
申请人： 中国科学院微生物研究所
摘要： 本发明公开了生产L-天冬氨酸的平台菌、基于该平台菌构建的生产β-丙氨酸的重组菌及其构建方法。通过改变大肠杆菌的葡萄糖摄入途径及糖酵解途径使磷酸烯醇式丙酮酸大量积累，进而增强固碳途径以获得大量的前体物质草酰乙酸，加强L-天冬氨酸合成途径相关基因靶点，通过引入辅因子循环系统解决共底物不足的问题，并改造中心代谢途径三羧酸循环以及敲除副产物竞争旁路，从而获得平台菌；基于该平台菌通过增强天冬氨酸脱羧酶的表达，获得重组菌。平台菌能够合成50.10±2.10mM L-asp，转化率达到1.00M/M葡萄糖；重组菌能够合成76.01±2.80mM β-丙氨酸，转化率为1.52M/M葡萄糖。本发明具有重要应用价值。
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公开(公告)号：CN110734887A
公开(公告)日：2020-01-31
申请号：CN201810789222.4
申请日：2018-07-18
申请人： 中国科学院微生物研究所
摘要： 本发明公开了一种产N-乙酰谷氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明所提供的产N-乙酰谷氨酸的基因工程菌的构建方法包括：将N-乙酰谷氨酸合成酶基因导入宿主菌得到产N-乙酰谷氨酸(NAG)的重组菌，通过阻断N-乙酰谷氨酸分解代谢途径，以及改善前体乙酰辅酶A的供应提高NAG的产量。利用本发明所构建的产NAG的基因工程菌生产NAG，具有以下优点：通过导入优良性状的N-乙酰谷氨酸合成酶得到能够产NAG的工程菌；通过阻断N-乙酰谷氨酸分解代谢途径使NAG得以高效积累；通过前体乙酰辅酶A供应的改善，提高了NAG的合成效率。实验证明，本发明所制备的产N-乙酰谷氨酸的重组菌可以高效地合成N-乙酰谷氨酸。
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公开(公告)号：CN108802366B
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201710306828.3
申请日：2017-05-04
申请人： 中国科学院微生物研究所 , 中国科学院大学
IPC分类号： G01N33/535 , G01N33/68
摘要： 本发明公开了一种检测待测样本中目标蛋白的含量的方法。该方法通过引入能够与目标蛋白紧密结合的目标蛋白抗体与在大肠杆菌体内通过BirA蛋白催化而被生物素修饰的不同数量bap肽段的融合蛋白，将生物素‑亲和素系统与抗原‑抗体相互作用连接起来，从而实现基于生物素‑亲和素系统的不同级数的放大。实验证明，采用本发明提供的方法可检测待测样本中目标蛋白的含量，还能够根据目标蛋白的浓度调整融合蛋白的种类、比例、浓度来满足不同的检测需求。本发明具有重大的应用价值。
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公开(公告)号：CN118685334A
公开(公告)日：2024-09-24
申请号：CN202310298300.1
申请日：2023-03-24
申请人： 中国科学院微生物研究所
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/113 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12P13/06 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了产L‑异亮氨酸的工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明要解决的技术问题是：如何实现对背景清晰的大肠杆菌进行纯理性设计，降低L‑缬氨酸的积累并提高L‑异亮氨酸的转化率。本发明通过在大肠杆菌中过表达与L‑异亮氨酸合成相关基因，增强L‑异亮氨酸的合成通路，同时通过旁路途径的阻断，调整前体磷酸烯醇式丙酮酸和丙酮酸比例，减少了副产物L‑缬氨酸的积累，开发了一套全细胞催化合成L‑异亮氨酸的方法，实现在大肠杆菌中以葡萄糖为单一底物高效合成L‑异亮氨酸，大幅降低了副产物L‑缬氨酸的积累。通过这种方式可以以廉价葡萄糖为原料，用大肠杆菌全细胞催化高效合成L‑异亮氨酸。
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公开(公告)号：CN111748506B
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN201910247604.9
申请日：2019-03-29
申请人： 中国科学院微生物研究所
摘要： 本发明公开了产胍基乙酸的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明提供了一种产胍基乙酸工程菌的构建方法，包括如下步骤：将与胍基乙酸合成相关基因L‑精氨酸：甘氨酸脒基转移酶编码基因导入宿主菌，得到产胍基乙酸工程菌；所述宿主菌为大肠杆菌或突变型大肠杆菌。本发明通过表达外源蛋白的方法，在大肠杆菌中构建了本底不存在的AGAT催化反应。同时，通过质粒过表达蛋白、染色体上替换启动子及基因敲除等方式，增强大肠杆菌鸟氨酸循环代谢通路的流量，解除鸟氨酸对AGAT催化反应的抑制，利用全细胞催化法循环利用精氨酸生产胍基乙酸，具有良好的环境与经济前景。
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公开(公告)号：CN112831451A
公开(公告)日：2021-05-25
申请号：CN201911164379.9
申请日：2019-11-25
申请人： 中国科学院微生物研究所
摘要： 本发明公开了丙谷二肽的工程菌及其构建方法与应用。本发明提供了一种产丙谷二肽的基因工程菌的构建方法，包括如下步骤：将L‑氨基酸‑α‑连接酶的编码基因和/或谷氨酰胺合成酶的编码基因导入受体菌，得到产丙谷二肽的基因工程菌。本发明通过全细胞催化合成丙谷二肽。本方案操作简单；无需氨基酸保护；反应条件温和；无需使用有毒试剂，环境友好；副产物少，大大降低了下游纯化成本。
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