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发明公开
CN107384924A 一种可联合丙戊酸共同使用提高表达水平的抗凋亡CHO-K1细胞系的构建方法 无效 - 驳回

  • 专利标题： 一种可联合丙戊酸共同使用提高表达水平的抗凋亡CHO-K1细胞系的构建方法
  • 专利标题（英）： Construction method of anti-apoptosis CHO-K1 cell line capable of improving expression level by combining with valproic acid
  • 申请号： CN201710655728.1
    申请日： 2017-08-03
  • 公开(公告)号： CN107384924A
    公开(公告)日： 2017-11-24
  • 发明人: 周松涛 , 曹啸东 , 金坚
  • 申请人： 江南大学
  • 申请人地址： 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号
  • 专利权人： 江南大学
  • 当前专利权人： 江南大学
  • 当前专利权人地址： 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号
  • 代理机构： 无锡华源专利商标事务所
  • 代理商 聂启新
  • 主分类号： C12N15/113
  • IPC分类号： C12N15/113 ;  C12N15/66 ;  C12N15/85
一种可联合丙戊酸共同使用提高表达水平的抗凋亡CHO-K1细胞系的构建方法
摘要：
本发明公开了一种可联合丙戊酸共同使用提高表达水平的抗凋亡CHO-K1细胞系的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：(1)在BAK、BAX基因的外显子上分别设计出相应的sgRNA序列；(2)制备PSK-sgRNA-BAK、PSK-sgRNA-BAX质粒；(3)将质粒转染至CHO-K1细胞中，之后经过筛选，挑选单克隆；获得不同的细胞系；(4)Western Blot检测；(5)功能鉴定及验证；(6)利用敲除型细胞系构建的外源蛋白表达细胞系能联同丙戊酸一起使用，进一步的提升外源蛋白表达水平。本发明制得的稳定细胞系能够延长其重组蛋白合成时间，获得更多的重组蛋白。
摘要（英）：

The invention discloses a construction method of an anti-apoptosis CHO-K1 cell line capable of improving expression level by combining with valproic acid. The construction method comprises the following steps: firstly, respectively designing out corresponding sgRNA sequences on exons of BAK and a BAX genes; secondly, preparing PSK-sgRNA-BAK and PSK-sgRNA-BAX plasmids; thirdly, transfecting the plasmids into CHO-K1 cells and then screening and selecting monoclone to obtain different cell lines; fourthly, carrying out Western Blot detection; fifthly, carrying out functional identification and verification; sixthly, jointly using an exogenous protein expression cell line constructed by knockout cell lines and the valproic acid to further improve the expression level of the exogenous protein. According to the stable cell line prepared by the method disclosed by the invention, synthetic time of recombinant protein of the stable cell line can be prolonged and more recombinant proteins are obtained.

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