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公开(公告)号：CN109207432B
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN201811275713.3
申请日：2018-10-30
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因组内NW_006883358‑1稳定表达蛋白质的应用，所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_006883358.1的第6874389碱基处；所述位点附近6874325‑6874443范围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。本发明申请在CHO细胞基因组内的固定位置，导入不同蛋白质基因，并进行稳定表达。
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公开(公告)号：CN109295092A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811274637.4
申请日：2018-10-30
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因组内NW_003613638-1稳定表达蛋白质的应用，所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_003613638.1的第1969647碱基处；所述位点附近范1969591-1969721围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。本发明申请在CHO细胞基因组内的固定位置，导入不同蛋白质基因，并进行稳定表达。
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公开(公告)号：CN109136193A
公开(公告)日：2019-01-04
申请号：CN201811274848.8
申请日：2018-10-30
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N5/0682 , C12N15/85 , C12N15/907 , C12N2510/02
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因组内NW_006884764‑1稳定表达蛋白质的应用，所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_006884764.1的第66645碱基处；所述位点附近66571‑66691范围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。本发明申请在CHO细胞基因组内的固定位置，导入不同蛋白质基因，并进行稳定表达。
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公开(公告)号：CN107557390A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710841267.7
申请日：2017-09-18
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N15/867 , C12N15/65 , C12N5/10
CPC分类号： C12N5/10 , C12N15/65 , C12N15/867
摘要： 本发明公开了一种筛选CHO细胞系高表达位点的方法，所述方法将带有绿色荧光基因的慢病毒整合到CHO细胞基因组中，通过流式分选方法将荧光表达量高的单克隆细胞收集并扩培后，再利用染色体移步技术筛选出相应的高表达整合位点。本发明方法结合CRISPR/Cas9介导的定点整合技术，可以快速的在已找到的位点上精确插入所要表达的外源基因，可以快速高效获得外源蛋白高表达细胞系。
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公开(公告)号：CN107384924A
公开(公告)日：2017-11-24
申请号：CN201710655728.1
申请日：2017-08-03
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/66 , C12N15/85
CPC分类号： C12N15/113 , C12N15/66 , C12N15/85 , C12N2310/10
摘要： 本发明公开了一种可联合丙戊酸共同使用提高表达水平的抗凋亡CHO-K1细胞系的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：(1)在BAK、BAX基因的外显子上分别设计出相应的sgRNA序列；(2)制备PSK-sgRNA-BAK、PSK-sgRNA-BAX质粒；(3)将质粒转染至CHO-K1细胞中，之后经过筛选，挑选单克隆；获得不同的细胞系；(4)Western Blot检测；(5)功能鉴定及验证；(6)利用敲除型细胞系构建的外源蛋白表达细胞系能联同丙戊酸一起使用，进一步的提升外源蛋白表达水平。本发明制得的稳定细胞系能够延长其重组蛋白合成时间，获得更多的重组蛋白。
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公开(公告)号：CN109295092B
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN201811274637.4
申请日：2018-10-30
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因组内NW_003613638‑1稳定表达蛋白质的应用，所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_003613638.1的第1969647碱基处；所述位点附近范1969591‑1969721围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。本发明申请在CHO细胞基因组内的固定位置，导入不同蛋白质基因，并进行稳定表达。
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公开(公告)号：CN109207432A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201811275713.3
申请日：2018-10-30
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因组内NW_006883358-1稳定表达蛋白质的应用，所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_006883358.1的第6874389碱基处；所述位点附近6874325-6874443范围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。本发明申请在CHO细胞基因组内的固定位置，导入不同蛋白质基因，并进行稳定表达。
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公开(公告)号：CN109337927B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN201811274680.0
申请日：2018-10-30
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因组内NW_006880285‑1稳定表达蛋白质的应用,所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_006880285.1的第1235357碱基处；所述位点附近1235284‑1235429范围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。本发明申请在CHO细胞基因组内的固定位置，导入不同蛋白质基因，并进行稳定表达。
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公开(公告)号：CN109321604B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN201811274640.6
申请日：2018-10-30
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因组内NW_006882077‑1稳定表达蛋白质的应用，所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_006882077.1的第691045碱基处；所述位点附近690980‑691090范围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。本发明申请在CHO细胞基因组内的固定位置，导入不同蛋白质基因，并进行稳定表达。
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公开(公告)号：CN109295093B
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN201811274846.9
申请日：2018-10-30
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种CHO细胞基因组内NW_006882456‑1稳定表达蛋白质的应用，所述CHO细胞基因组内用于稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_006882456.1的第1020651碱基处；所述位点附近1020585‑1020690范围内可被CRISPR/Cas9技术识别的5'NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG3'为靶序列。本发明申请在CHO细胞基因组内的固定位置，导入不同蛋白质基因，并进行稳定表达。
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