采用敲除技术建立Gadd45a敲除兔模型的方法
摘要:
一种采用敲除技术建立Gadd45a敲除兔模型的方法,属于生物技术领域。本发明的目的是利用Crispr/cas9技术敲除GADD45a基因,构建兔模型,探究该基因对于动物肝脏影响的采用敲除技术建立Gadd45a敲除兔模型的方法。本发明的步骤是:构建sgRNA、合成双链DNA、p UC-57载体线性化、连接p UC-57载体和双链DNA、转化、单克隆的挑取及质粒DNA的提取、鉴定质粒测序、CAS9表达质粒,经酶切线性化,用于体外转录。本发明经过相关检测,成功获得Gadd45a敲除兔模型,该模型的获得能够在给予相应酒精刺激后模拟临床上脂肪肝、肝硬化和肝癌等肝功能病的病理过程,能更有效地预测新疫苗、新药和新诊断试剂等在临床应用中的效果,同时大大降低新药研发的风险,为临床研究提供基础模型。
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