本发明公开了检测柯萨奇病毒A组6型(CV‑A6)中和抗体的检测方法及所应用的重组病毒。本发明利用2种重组质粒包装的假病毒系统检测中和抗体，由于采用了单周期感染的假病毒，所以没有使用活病毒时的安全问题。经过多个试验，其结果表明该发明中所陈述的假病毒检测系统是一种安全，灵敏，快速，特异，简便且成本低廉的检测CV‑A6中和抗体的方法。基于以上特点，该假病毒检测系统非常适合于快速，大规模地检测中和抗体的试验，对于CV‑A6病毒疫苗的研制及检测患者个人及人群CV‑A6特异性中和抗体水平有着重要的应用价值。