柯萨奇病毒A10型假病毒的包装及血清中和抗体检测方法

    公开(公告)号:CN110452921A

    公开(公告)日:2019-11-15

    申请号:CN201910672658.X

    申请日:2019-07-24

    摘要: 本发明公开柯萨奇病毒A10型假病毒的表达及血清中和抗体检测方法,包括一种用于包装CA10型假病毒的重组表达质粒,重组表达质粒命名为CA10-EGFP-CAPSID质粒,重组表达质粒具有序列表中SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;一种表达CA10-EGFP-CAPSID重组质粒的方法,包括以下步骤:1)将绿色荧光蛋白的基因序列与CA10所有结构蛋白的基因序列拼接;2)并将2A蛋白酶的酶切位点插入绿色荧光蛋白基因的前段;3)设计引物。一种由CA10-EGFP-CAPSID质粒表达的柯萨奇病毒A10结构蛋白和EV71-LUC-REPLICON复制子转录的EV71亚基因组RNA组装而成的假病毒以及包含该假病毒的中和抗体试剂盒。本发明提供一种安全、灵敏、快速、特异、简便且成本低廉的检测CA10中和抗体的方法,采用了单周期感染的假病毒,所以没有使用活病毒时的安全问题。

    基于PMA-qRT-PCR法的甲型肝炎疫苗病毒滴度快速检测方法

    公开(公告)号:CN111500772B

    公开(公告)日:2022-10-18

    申请号:CN202010350604.4

    申请日:2020-04-28

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/686 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种基于PMA‑qRT‑PCR法的甲型肝炎疫苗病毒滴度快速检测方法,将人二倍体细胞和甲型肝炎疫苗孵育后,加入终浓度为50μM的PMA,混匀,2‑8℃避光孵育30min后置于光解仪上光解30min;然后抽提核酸,用qRT‑PCR试剂盒进行定量检测,并以标准品结果绘制回归曲线,以所得结果表示待测样品的病毒滴度。本发明的检测方法1天即可完成全部实验,极大缩短了检验周期,且具备良好的线性、平行性、灵敏度、重复性、相关性、特异性和适用性,可检测法定方法测定滴度为5.0~8.0lgCCID50/ml的样品,满足国内疫苗生产企业注册标准中关于甲型肝炎疫苗成品病毒滴度检测范围的要求。

    一种EV-D68型假病毒及其包装方法
    8.
    发明公开

    公开(公告)号:CN110468145A

    公开(公告)日:2019-11-19

    申请号:CN201910671669.6

    申请日:2019-07-24

    摘要: 本发明公开一种包装用于包装EV-D68型假病毒的表达子质粒,所述EV-D68型假病毒的表达子质粒命名为D68-EGFP-CAPSID质粒,所述重组表达质粒具有序列表中SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;一种用于包装EV-D68型假病毒的复制子质粒,所述EV-D68型假病毒的复制子质粒命名为D68-LUC-REPLICON质粒,所述复制子质粒具有序列表中SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。进一步的,所述质粒含有D68病毒5’UTR,P2-P3-3’UTR基因和萤火虫荧光素酶报告基因(Luciferase)基因。本发明一种EV-D68型假病毒及其包装方法成功包装出单周期感染的D68假病毒,该假病毒可以用来替代D68活病毒、没有使用活病毒时的安全问题,可应用于D68病毒的多种研究,对D68病毒的基础研究有着重要的应用价值。