本发明公开了一种人工合成cry1Ah1基因及其应用，该人工合成cry1Ah1基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示或如SEQ ID NO.3所示。本发明选取Bt杀虫基因crylAh1基因野生型序列为原始序列对cry1Ah1基因编码区全长起始密码子开始第64nt-1998nt杀虫关键区域共645个氨基酸，在不改变原有氨基酸一级序列的前提下进行密码子优化，获得cry1Ah1-B基因和cry1Ah1-U基因，将优化后的基因与优化前基因的所有基因翻译的蛋白经过tBlastX比较均完全一致。对转cry1Ah1改造基因植株的RT-PCR鉴定分析，表明cry1Ah1-B、cry1Ah1-U与野生cry1Ah1基因表达效率有明显差别，转Bt基因杨树的ELISA测定结果表明，包括对照组在内的所有株系总蛋白量保持在24.013mg/g~26.667mg/g之间，虫试结果较为良好的株系中A-3-4、A-5-0、A-5-23和Z-1-3四个株系的毒蛋白含量在4669.38ng/g~9342.33ng/g之间，抗虫效果明显。