本申请属于烟草代谢组学技术领域，具体涉及一种新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法专利申请事宜。该方法可对新鲜烟叶中的SA、IAA、IBA、JA、ABA、GA、BR中一种或任意几种组合同时进行检测，该方法包括：对预处理后新鲜烟叶进行萃取，制备待检液，液相色谱‑串联质谱检测分析等操作。本申请采用LC‑MS/MS法进行检测时，灵敏度较高，且可单独测一种、或者同时测几种、甚至同时对7种内源性植物激素进行定性或定量测定。再者，由于正负离子选择性检测模式选择性好、干扰小、效率高，尤其是检测一个样本的时间仅10 min，因此本发明能有效地提高分析效率，非常适合复杂基质中低含量目标物的分析。