本发明公开了一种黑孢松露接种菌剂及其处理方法和菌根的培育方法，黑孢松露接种菌剂的重量配比如下：黑孢松露子实体10‑20份，农林保水剂2–4份，赤霉素0.008–0.015份，氯吡脲0.001–0.002份，蛭石粉50–80份，石灰石粉10–15份。黑孢松露接种菌剂的处理方法，将黑孢松露接种菌剂装入容器内，首先用液氮淋冻2‑5min，放置在‑80℃保存15‑20天，再放置在‑20℃孵育10‑15天，最后放置在4℃孵育25‑40天，然后接种无菌宿主苗。本发明能提高黑孢松露菌根的浸染率及根系活力。