本发明公开了一种芝麻蛋白的制备方法，包括如下步骤：将芝麻粉原料和水混匀制得芝麻原浆液，并加入一次复合酶酶解，得到一次酶解液；调节一次酶解液pH并进行酸沉处理，得到酶解蛋白粉；向酶解蛋白粉中加入氢氧化钠溶液调节其pH并完全溶解，得到蛋白复溶液；将蛋白复溶液依次进行超滤和反渗透浓缩处理，得到浓缩蛋白；将浓缩蛋白和水按一定比例混匀制得蛋白浆液，加入二次复合酶进行酶解，并经离心分离得到蛋白沉淀，水洗蛋白沉淀pH至中性，即得到纯化蛋白粉；将纯化蛋白粉进行冷冻干燥处理，即得芝麻蛋白。本发明提供的芝麻蛋白的制备方法，工艺安全、制备便捷。