本发明公开了一种抗菌多肽HF‑18及其制备方法和应用，该抗菌多肽HF‑18的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明从八目鳗鱼多肽HFIAP‑1出发，通过构效关系研究，获得α螺旋程度较好的18个氨基酸的多肽，并将其第12位的组氨酸替换为赖氨酸及第14位的甘氨酸替换为疏水性的苯丙氨酸，得到多肽HF‑18(GFFKKAWRKVKKAFRRVL)。本发明制备所得的多肽HF‑18，α螺旋程度和疏水性提高，合成成本降低，具有良好的体内外抗菌活性，可以应用于各种普通感染及顽固感染性疾病，作为现有抗生素的优良替代药物或辅助药物。