本发明公开了一种表达α‑L‑鼠李糖苷酶的重组大肠杆菌及其应用，属于基因工程技术与生物医药领域。将编码序列为SEQ ID NO.2所述序列在大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表达，用0.5μmol/L IPTG进行诱导并获得活力为5.6U/L的重组鼠李糖苷水解酶。该重组酶具有特异性水解芦丁、橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷以及朝藿定C鼠李糖苷的活性。重组酶添加量为460U/L时，90min内完全催化水解1g/L的朝藿定C生成唯一产物淫羊藿苷。