本发明公开了一种SIRT1基因敲除的IPEC‑J2细胞系的构建方法，包括如下步骤：(1)针对SIRT1基因的第一外显子设计并合成gRNA探针，gRNA的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，其反向互补序列如SEQ ID NO.2所示；(2)将退火后形成反向互补的双链gRNA探针克隆到如图2所示的pSpCas9‑2A‑PuroV2.0载体中，构建同时表达如SEQ ID NO.1所示sgRNA和Cas9蛋白的质粒；(3)将步骤(2)构建好的质粒转染到IPEC‑J2细胞；(4)从步骤(3)转染后的IPEC‑J2细胞筛选单克隆突变细胞系，得到SIRT1基因敲除的IPEC‑J2细胞系，其相比野生型细胞系，缺少了SIRT1基因第一外显子中的5个碱基。本发明首次构建SIRT1基因敲除的IPEC‑J2细胞系，筛选得到稳定的单克隆SIRT1基因敲除IPEC‑J2纯合细胞系，可作为研究仔猪肠道氧化应激的细胞模型。