本发明公开了一种高效液相色谱法测定托伐普坦原料药中有关物质的方法，采用流动相A+流动相B的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱，流动相A为甲酸水溶液、乙酸水溶液、三氟乙酸水溶液中的一种，流动相A中，酸的体积百分比为0.05%～0.5%，流动相B为甲醇和/或乙腈。本发明的方法通过选择合适的流动相以及洗脱条件，能够将托伐普坦原料药与各杂质在同一色谱条件下进行快速有效的分离，主峰与相邻杂质峰、各杂质峰之间均能达到基线分离。本发明的方法专属性强、灵敏度高、精密度好、准确度高，能够有效控制托伐普坦原料药的质量，最终保证了托伐普坦原料药的有效性和安全性。