本发明涉及NADP+依赖型的底物亲和力和辅酶亲和力明显提高的甲酸脱氢酶突变体、其编码核酸，含有该核酸序列的重组表达载体和重组表达转化体。甲酸脱氢酶突变体是将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第30位精氨酸、第124位异亮氨酸、第146位甘氨酸、第216位甘氨酸、第261位脯氨酸、第262位丝氨酸、第287位丙氨酸、第361位精氨酸或第381位谷氨酰胺中的一个或多个氨基酸残基替换为其他氨基酸残基所形成的新氨基酸序列构成的衍生蛋白质，所述衍生蛋白质的底物亲和力、辅酶亲和力相较于如SEQ ID No.2所示氨基酸序列构成的甲酸脱氢酶的底物亲和力、辅酶亲和力提高。与现有技术相比，本发明所述突变体具有高底物亲和力和辅酶亲和力等优势，具有很好的应用前景。