本发明提供一种小带鱼源抗菌肽添加剂及其制备方法，属于生物学技术领域，抗菌肽的氨基酸序列为FSCAECGCCYSCRG，其制备方法包括，将小带鱼中加入Tris‑HCl缓冲液，磨碎，蒸煮；将小带鱼中加入中性蛋白酶进行酶解，灭酶；将酶解液加入截留分子量为3kDa的离心超滤管中，离心得到＜3kDa部分粗品，然后采用离子交换层析分离、凝胶层析分离、反相高效液相色谱纯化，即得抗菌肽添加剂。本发明小带鱼源抗菌肽添加剂抑菌活性强，可用于制备抗菌组合物，制得的抗菌组合物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有抗菌活性。