一种金枪鱼白肉ACE抑制肽及其制备方法，涉及ACE抑制肽制备领域，金枪鱼白肉ACE抑制肽的肽段氨基酸序列为Ser‑Pro或Val‑Asp‑Arg‑Tyr‑Phe，包括以下制备步骤：1）将金枪鱼白肉解冻、烘干除去水份，随后脱脂、烘干；2）将预处理后的白肉粉末加入蒸馏水，调节pH值后，加入蛋白酶进行酶解，得到酶解液；3）将酶解液进行灭酶处理，离心取上清液，得灭酶酶解液，冷冻干燥，得到多肽粉，测ACE抑制活性；4）随后将灭酶酶解液进行超滤、柱层析、高效液相色谱纯化、氨基酸测序，得到金枪鱼白肉ACE抑制肽，本发明制备得到的金枪鱼白肉ACE抑制肽抑制活性好，制备成本低，效率高，适用工业生产。