本发明公开了一种preS1抗体、乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒、制备方法、使用方法。其中，本申请中的酶免检测试剂盒包括：preS1抗原包被酶标反应板、样品稀释液、m×浓缩洗涤液、HRP酶标抗人二抗、TMB底物反应液、终止液以及preS1抗体系列梯度标准品；preS1抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；preS1抗体包括重链可变区和轻链可变区，preS1抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本申请的乙型肝炎病毒前S1抗体酶免检测试剂盒，基于定量检测preS1抗体的技术，来检测人体血清、血浆中preS1抗体的含量，用于发现早期乙肝感染者，同时还能用于评估患者感染后的预后能力和用药的治疗效果。