本发明公开了一种链霉菌分泌型表达载体及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域，本发明提供了一种链霉菌分泌型表达载体，所述链霉菌分泌型表达载体中包含如SEQ ID NO.1所示的序列，该表达载体具体为：将强启动子PA4以及特定的分泌信号肽与待表达目的基因N端融合，并插入至常规载体中构建得到重组质粒，可使目的基因表达并将表达的目的蛋白分泌至胞外，在重组菌株的发酵培养过程中，可以直接从发酵液中收集得到分泌表达的外源目的蛋白。所述载体的构建方法简单快速，并且可直接将目的蛋白分泌至胞外，利于目的蛋白的收集，避免了异源蛋白积累造成的细胞毒性。