一种利用棕榈油提取物分离纯化发酵液中维生素K2的方法，对发酵液进行分离得到湿菌体，再冷冻干燥得到干菌体，将干菌体与棕榈油提取物混合2~4h，离心取上清液；将已经预处理的大孔树脂进行装柱，将上清液置于充满大孔树脂的分离柱中，使用第一洗脱剂除去杂油类物质，然后使用第一解析剂将维生素K2从大孔树脂上洗脱下来得到洗脱液；得到的洗脱液进行浓缩得到浓缩液；将所述浓缩液置于容纳有反相硅胶的分离柱中，以第二洗脱剂除去杂质，再用第二解析剂洗脱，得到高纯度维生素K2产品，进行冷冻结晶即得到维生素K2晶体。本发明使用的棕榈油提取物存在于自然界中，获取较为简单且不会产生有机废液，大大减少对环境的污染。