本发明涉及分离工程技术领域，具体公开了一种分离和纯化2’‑岩藻糖基乳糖的方法，方法包括以下步骤：S1.过膜除菌体，得到膜清液；S2.电渗析脱盐：将步骤S1制备的膜清液经过电渗析脱盐，以盐类电解质为电解质，淡室装膜清液，浓室装去离子水，得溶质浓度为20～100g/L、电导率为400‑2000us/cm的电渗透除盐浓液；S3.过滤除蛋白、脱色、过滤，得滤液；S4.浓缩、结晶，得2’‑岩藻糖基乳糖。本发明的方法简单，不需要复杂反复的离子交换，也不需要使用有机超滤膜，节省了生产成本，并且得到的2’‑岩藻糖基乳糖的浓度可达99％，收率可达80％，可应用于工业化生产。