本发明提供一种订书钉核酸、DNA纳米机器人及其制备方法和应用，所述订书钉核酸包含具有SEQ ID No.1～138任一项所示的核苷酸序列；所述DNA纳米机器人的制备原料包括所述订书钉核酸的组合、支架链核酸溶液和缓冲液；在制备精度上，所述DNA纳米机器人可以达到50nm左右，成型一致性好，具有巨大的加工优势；且所述DNA纳米机器人还具有制备方法简单、生物相容性好的优势，可大批量生产，在医学材料和医疗器械领域具有较广阔的应用前景。