本发明公开了一种新型冠状病毒中和抗体酶联免疫法检测试剂盒，由设在盒体内的包被有RBD蛋白的微孔板、作为阳性对照的RBD中和抗体标准品溶液、阴性对照、样品稀释液、重组ACE2蛋白酶结合物、20×浓缩洗涤液、显示液A、显示液B、终止液和说明书构成。本发明还公开了所述试剂盒在检测含新型冠状病毒中和抗体生物样品中的应用。实验证实本发明的试剂盒稳定性高、选择性强，检测速度快、费用低廉、易于操作，克服了现有技术中检测中和抗体时，实验室环境要求高、操作时长等缺点，操作时间由120分钟缩短至45分钟，具有极大的临床应用前景。