本发明提供了一种重组新城疫病毒基质蛋白及其应用，所述重组新城疫病毒基质蛋白为发生了R247K和/或S263R突变的基质蛋白；所述新城疫病毒为新城疫病毒疫苗株La Sota株。本发明还提供了一种核酸分子、一种重组载体、一种重组细胞、一种重组新城疫病毒及其制备方法以及一种新城疫病毒疫苗。所述重组新城疫病毒基质蛋白具有更好的核质穿梭效率、更强的出胞能力及更快的出芽速度，可以促进新城疫病毒的增殖与释放；含有重组基质蛋白的重组新城疫病毒具有更高的滴度和更快的增殖速度，且依然保持弱毒毒力，对于疫苗的研发与改进具有重要的意义。