本发明公开了一种提高唾液酸产量的方法与应用，属于酶工程、微生物工程领域。本发明对N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶的酶催化活性关键氨基酸位点Gly371进行饱和突变，筛选提高催化效率的酶突变体。通过过量表达催化效率提高的N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶突变体和N‑乙酰神经氨酸醛缩酶，提高重组大肠杆菌催化生产唾液酸的生产效率；采用本发明构建的含有G371C的重组大肠杆菌和含有G371A的重组大肠杆菌全细胞催化制备得到Neu5Ac产量分别为352.0和353.6mmol·L‑1，显著高于野生型重组菌，同时，含有突变体的重组菌株催化GlcNAc转化生成Neu5Ac的转化效率，显著高于对照菌株。