本发明提供一种使用鼠李糖脂发酵液制备的糖脂型离子液体及其制备工艺和应用。所述制备工艺为：过滤鼠李糖脂发酵液得到鼠李糖脂无菌液；无菌液中加入酸，收集沉淀物得到固体鼠李糖脂；将鼠李糖脂与二烷基胺化合物混合，加入溶剂，静置分层，分离后得到鼠李糖脂离子液体。本发明的离子液体结构新颖，除了具有离子液体的化学惰性、高沸点、良好导电性以外，尤其对糖脂具有高溶解性及稳定性，且与水不互溶，使糖脂从发酵液中的分离变得更为简易，从而大大降低了糖脂分离纯化的难度。