本发明提供一种提高牛胚胎干细胞多能性的方法，包括向牛胚胎干细胞体外培养体系中添加终浓度为10‑40μg/mL的抗肿瘤药物naringenin进行维持培养。通过多能性检测，结果表明naringenin可显著增强牛胚胎干细胞多能因子的表达，同时naringenin可促进牛胚胎干细胞系原有的多种表观形态趋向均一。本发明提供的应用抗肿瘤药物naringenin体外培养牛胚胎干细胞多能性的方法，为转基因克隆牛的研究与生产提供了可用于基因转染和体外长期培养筛选的牛胚胎干细胞，并可用于进一步地牛胚胎干细胞相关研究。