本发明涉及一种快速检测幽门螺旋杆菌耐药性的试剂盒及方法，设置不同浓度的抗生素实验组及阴性对照组，不同抗生素浓度实验组是指将不同浓度的抗生素添加到重水培养基的实验组，阴性对照组是指不添加抗生素的实验组，孵育离心后清洗，对样品进行拉曼检测，根据得到的拉曼图谱分析计算C‑D比率即C‑D/(C‑D+C‑H)，不同浓度的抗生素实验组C‑D比率减去对照组C‑D比率即△C‑D比率，与临界值(‑0.0075)对比判定幽门螺旋杆菌敏感、耐药。本发明引入液体培养方式孵育幽门螺旋杆菌，将重水拉曼技术应用于幽门螺旋杆菌耐药性检测，能够更准确、快速判定幽门螺旋杆菌对抗生素的敏感性，对指导幽门螺旋杆菌患者用药治疗有重大的意义。