本发明提供一种重组猫细小病毒VP2蛋白抗原及其在疫苗制备和病毒诊断中的应用。使用原核表达载体，将猫细小病毒VP2蛋白的多个B细胞抗原进行串联表达。将表达的重组蛋白纯化并作为包被抗原，用于检测猫细小病毒抗体。与包被全病毒的方法平行比较，显示其检测阴阳性血清的值高度一致。本发明的抗原处理方便，且缩短了试验时间，操作步骤更简单。本发明建立间接ELISA方法，用以检测猫血清中猫细小病毒的抗体水平，具有重复性好、特异性高的特点，可用于猫细小病毒血清学调查。因此，本发明提供的基于VP2蛋白B细胞抗原串联表达的猫细小病毒间接ELISA检测试剂盒非常适合临床大样本的检测，适合大规模推广。